Testosteron är det mest verksamma av de manliga könshormonerna (androgenerna) och bildas i testiklarnas Leydig-celler efter stimulering genom luteiniserande hormon (LH). Hos alla människor bildas dessutom små mängder testosteron i binjurebarken. Hos kvinnan sker cirka halva produktionen av testosteron i äggstockarna.