Nils Gyllenstierna studerade i unga år i Wittenberg och utsågs 1560 av Erik XIV till riksråd och kansler. Han ledde 1561–62 förhandlingar i England om Eriks giftermålsplaner, varefter han sändes till Hessen för att söka uppnå giftermål och förbund, men utan framgång. Under upproret mot Erik XIV stödde Gyllenstierna länge