Grunden för Uffizierna är släkten Medicis samlingar, vilka 1737, då den siste storhertigen av släkten dog, skänktes till storhertigdömet Toscana. De innehåller talrika exempel på höjdpunkter i äldre italienskt måleri med verk av bland andra Cimabue, Giotto, Botticelli (”Våren”, ”Venus födelse”), Mantegna, Leonardo da Vinci, Michelangelo, Rafael, Tizian och Correggio.