Pyruvat i sin tur bildas vid nedbrytning av enkla föreningar, t.ex. laktat, aminosyror eller glycerol. Glukoneogenesen sker huvudsakligen i lever och njure. Dess omfattning ökar i samband med energibrist (t.ex. vid fasta eller svält) eller ökad energiomsättning då kroppens kolhydratförråd är lägre än normalt.